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蚯蚓冻干机的纤溶酶冻干粉的方法

更新时间:2022-04-26      点击次数:684
  蚯蚓冻干机在药材冻干机制备蚯蚓纤溶酶冻干粉的方法!真空冷冻干燥技术简称冻干技术,是一项对食品护色、保鲜、保质的高新加工技术。目前广泛用于果蔬、肉禽、水产、调味品、方便食品及名优特产等干燥,可达到保持食品原有的色、香、味、形、新鲜度不变的目的,且复水性特好,成品便于贮存和运输,费用降低,保存期延长。在干燥蜂皇浆、人参、龟、鳖、蚯蚓等营养保健品,采用真空冷冻干燥工艺,更使人们相信该营养品纯真自然。
 
  真空冻干机制备蚯蚓纤溶酶冻干粉的方法,其特征在于,包括如下步骤:
 
  步骤一、蚯蚓粗粉的制备:将活蚯蚓,饥饿一天,自然吐净泥沙,洗涤,而后在温度介于2035℃的通风条件干燥并制成粉碎,通过100200目筛制成蚯蚓粗粉;
 
  步骤二、粗酶溶液的制备:取蚯蚓粗粉用2倍体积的0.1mol/L,pH为7.8的磷酸缓冲液PBS匀浆,加0.1mol/LNaCl溶液,置于4℃冰箱内过夜,然后以10000r/min,4℃离心15min,弃沉淀,取上清;上清液于50℃水浴保温40min,流水冷却,再8000r/min,4℃离心10min,取上清,在上清液中加硫酸铵达30%饱和度,静置3小时,再8000r/min,4℃离心10min;收集上清液再加硫酸铵达70%饱和度,静置3小时,再8000r/min,4℃离心10min,收集沉淀;将沉淀溶于上述缓冲液中,对上述缓冲液以载留5KD分子量的透析袋透析过夜去盐,再将透析液8000r/min,4℃离心10min,取上清液即为蚯蚓纤溶酶粗酶溶液;
 
  步骤三、粗酶的纯化:将蚯蚓纤溶酶粗酶溶液过Sephadex G75凝胶层析,上柱前预先用0.02mol/L,pH为7.8的磷酸缓冲液平衡,上柱后用上述缓冲液洗脱至在280nm波长无光吸收,洗脱液出现2个蛋白峰,其中酶活性峰与第1个蛋白峰重叠,收集重叠部分的酶液,过DEAECellulose A52离子交换柱,过柱前先用0.05mol/L,pH为7.8的PBS平衡;然后用含00.5mol/L NaCl的PBS离子强度线性梯度洗脱,洗脱液出现3个蛋白峰,酶活性峰与蛋白峰第3峰重叠,其余2个蛋白峰基本无酶活性,收集活性部分即为蚯蚓纤溶酶纯酶;
 
  步骤四、蚯蚓纤溶酶的修饰:加入蚯蚓纤溶酶纯酶和活化的PEG到15mL,pH9.2,0.1mol/L的硼酸缓冲液中,纯酶与PEG的重量比是1:50,在30℃下,保温反应1小时,反应物对0.1mol/L,pH7.3的磷酸缓冲液透析过夜,透析液再以10000r/min,4℃离心l0min, 取上清液过柱Sephadex G75,收集活性成分,即为蚯蚓纤溶酶修饰酶;
 
  步骤五、蚯蚓纤溶酶冻干粉的制备:将蚯蚓纤溶酶修饰酶装在样品盘里,料厚不超过8mm,放进真空冷冻干燥机设备干燥室内进行冻干,于-35℃冷冻12小时,然后在5pa的真空度下,升温至30℃,干燥12小时;继续升温至40℃,真空干燥14小时,得到蚯蚓纤溶酶修饰酶的冻干粉,其含水量为7.0%,蛋白含量为68%,酶活力为1700U/mg。
 
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